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    教你快速了解制备型液相色谱仪

    科捷集团2019-07-31

    制备型加压液相色谱,依照色谱柱和样品量的大小,分为:(1)低压液相色谱;(2)中压液相色谱;(3)高压液相色谱;(4)快速色谱。低压、中压与高压液相色谱的压力范围之间会存在一定交叠,没有统一、明白的规范。

    LC600A液相色谱仪_副本


    1.快速色谱

    柱压通常为2bar(或30psi)左右,关于那些容易别离的简单混合物,由于快速色谱具有操作烦琐、经济等优点,常常是实验室的首xuan。但快速色谱不同于普通的层析别离,这种别离没有压力,而快速别离通常运用瓶装氮气加压,使活动相具有一定的流速,从而缩短了别离时间。Still等人率先于1978年细致研讨了快速色谱,并于1981年取得了专li维护(美国专li4,293,422)。

    快速色谱运用的柱子普通是玻璃柱,柱直径为3~10cm.长度为7~15cm。快速色谱中运用zui普遍的固定相为硅胶。采用的粒径通常为:25~40μm,40~63μm或63~200μm的球形固定相。其它如键合相、氧化铝、聚酰胺吸附剂也常用作快速色谱的固定相运用。

    2.低压色谱(LPLC)

    柱压普通低于5bar(或75psi)。

    低压色谱普通是由爬动泵、进样阀和检测器组成,能够连续化,完成自动的梯度淋洗和馏分搜集等操作。色谱柱管普通是玻璃或聚合物资料的,长度普通为240-440mm,内径为10-40mm。

    关于大多数在紫外区有吸收的物质,光学检测器很常用。填料普通运用软质的葡聚糖、琼脂糖、纤维素、合成高聚物或离子交流剂,粒径普通为40-60μm。

    3.中压液相色谱(MPLC)

    柱压在5-20bar(或75-300psi)之间,普遍用于实验室和工业范围的生物制品(如动物脏器提取液、浓缩液、体液、植物提取液、生物技术发酵液等--常常需求经过滤膜作初级净化)的处置,以提取或纯化所需的产品。

    中压液相制备色谱的主要部件为输液泵、进样阀、检测器、馏分搜集器等,比方瑞士公司的早期的中压液相制备色谱,其输液泵zui大流速可达156mL/min,并配有阻尼器,以保证液流的稳定;进样器配有0.5-50mL的不同体积的定量管;检测器有紫外和示差折光检测器,流通池体积比拟大,允许大流量活动相经过而无需分流;馏分搜集器有原盘式和排式两种,原盘式的接纳管zui多达80个,然后者则更多;色谱柱内径9-105mm,长度250-1760mm不等。

    关于普通中压制备色谱,当色谱柱直径较大时,柱头常常设计成锥形或有相似于伞状的液流导向构造,使得当大量样品进入到柱头上时,能疾速地分散到整个柱横截面上,及时被活动相冲走,防止了因样品的部分过浓而惹起柱超负荷和谱带加宽。柱子填料则采用比拟耐压的交联改性的多糖凝胶(如Sepharose CL,Superose等),聚合物微球,复合资料介质或硬质SiO2基体的化学键合相等,粒径普通在25~40μm(zui常用的填料尺寸是15-25μm,25-40μm或40-63μm),可采用湿法或干法装柱。

    4.高压液相色谱(HPLC)

    是指柱压普通大于20bar(或300psi)的“高压(或高效)液相色谱”,通常指所用色谱柱的塔板数大于2000,普通是在2,000~20,000的范围之间。

    当需求从大量的物质中别离纯化缺乏1%的所需成分时,别离工作将会非常艰难,常常在纯化的zui后阶段需求运用10μm或更小颗粒的高效填料。为取得所需微量组分,可采用如下别离手腕:制备型别离→半制备型别离→剖析型别离→产物。为进步每次别离取得纯品的数量,制备型高压液相色谱别离通常在超载状况下运转。

    高压液相色谱,即目前常用的高效液相色谱。色谱柱内填装的是粒度范围较窄的微小颗粒固定相(3~30μm),为使活动相流出,需采用较高的压力,同时系统的复杂性及本钱亦增大,但分辨率可得到较大的进步。而填装较大颗粒的固定相时,如中压液相色谱系统,装柱较容易,柱的通透性较高(只需较低的泵压力),可采用更大的色谱柱和更经济的仪器,由此分辨率也较低。

    5用剖析型高压液相色谱停止制备型别离

    当所需纯化合物的量很少时(微克级至几毫克),可用剖析型色谱柱停止屡次别离。效果和应用大直径色谱柱停止一次性别离相同。采用小直径色谱柱时,可应用已有的剖析型仪器,而无需在色谱柱、填料及附件方面投入更大资金;另外,还可在很大水平上防止由于放大所产生的问题,使别离速度加快。

    小直径色谱柱的尺寸普通为250×4.6mm,通常装有反相填料,每次可进样5~100ug,经过屡次进样别离,可取得足够的纯品。例如,Suzuki等(1994)报道从豆科植物羽扇豆(Lupinus Hirsutus)中别离一羽扇豆生物碱糖苷时,其zui后的别离步骤采用LiChrosorb Si60,5μm,250×4.6mm色谱柱停止高压液相色谱别离,洗脱剂为含25%甲醇的yi醚溶液-5%氨水50:1。

    经常需用剖析型色谱柱停止别离的一个范畴是对肽类化合物的纯化。生物活性肽的含量通常很低,用剖析型高压液相色谱作为zui后的纯化手腕时,不会使色谱柱超载。

    为了进步别离效率,可将剖析型高压液相色谱柱衔接起来运用。此时可采用颗粒度在20~30μm的填料,以坚持恰当的通透性,特别是当运用含水溶剂时。当运用己烷等有机溶剂时,由于活动相的粘度较低,可运用颗粒度为10μm的填料。

    但是由于剖析型色谱系统无法提供大范围制备型别离所需的流速,其应用遭到一定限制。

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